SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS

            Spektrofotometri UV-VIS merupakan alat dengan teknik spektrofotometer pada daerah ultraviolet (200-400 nm) dan sinar tampak (400-800 nm). Alat ini digunakan untuk mengatur serapan sinar ultraviolet atau sinar tampak oleh suatu materi dalam bentuk larutan. Konsentrasi larutan dianalisis sebanding dengan jumlah sinar yang diserap oleh zat yang terdapat dalam larutan tersebut.

Spektrofotometri UV- VIS biasanya digunakan untuk:

·         Menentukan kadar zat yang mempunyai gugus kromofor, ikatan rangkap terkonyugasi dan ausokrom dari suatu senyawa organik.

·         Menjelaskan informasi dari struktur berdasarkan panjang gelombang maksimum suatu senyawa.

·         Mampu menganalisa senyawa organik secara kualitatif dengan menggunakan hokum Lambert-beer.

Secara eksperimen hukum Lambert-beer akan terpenuhi apabila peralatan yang digunakan memenuhi kriteria berikut:

1.      Sinar yang masuk atau sinar yang mengenai sel sampel berupa sinar dengan panjang gelombang tunggal (monokromatis)

2.      Penyerapan sinar oleh suatu molekul yang ada di dalam larutan tidak dipengaruhi oleh molekul yang lain yang ada bersama dalam suatu larutan

3.      Penyerapan terjadi di dalam volume larutan yang luas penampang (tebal kuvet) yang sama

4.      Larutan yang diukur harus benar-benar jernih agar tidak terjadi hamburan cahaya oleh partikel-partikel koloid atau suspensi yang ada dalam larutan

5.      Konsentrasi analit rendah. Karena apabila konsentrasi tinggi akan mengganggu kelinearan grafik absorbansi versus konsentrasi

Aplikasi spektrofotometri UV-VIS

Syarat pengukuran dengan Spektrofotometer UV

·         Sampel dalam larutan menyerap sinar UV (200-400 nm)

·         Molekul senyawanya memiliki ikatan rangkap atau electron nonbonding

·         Larutan bening tidak berwarna

Syarat pengukuran dengan spektrofotometer Visibel

·         Sampel dalam larutan menyerap sinar tampak (400-800 nm)

·         Larutan sampel harus bening dan berwarna

·         Pelarut tidak menyerap sinar tampak

Spektrofotometer UV-VIS dapat digunakan untuk analisis kualitatif maupun analisis kuantitatif

·         Analisa kualitatif

Penggunaan alat ini dalam analisis kualitatif sedikit terbatas sebab spectrum sinar tampak atau sinar UVmenghasilkan puncak-puncak serapan yang lebih lebar sehingga dapat disimpulkan spectrum yang dihasilkan kurang menunjukkan puncak-puncak serapan. Namun, puncak yang dihasilkan berbentuk lebar, puncak tersebut masih dapat digunakan untuk memperoleh keterangan ada atau tidaknya gugus fungsional tertentu dalam suatu molekul organik.

·         Analisa kuantitatif

Langkah-langkah utama:

1.      Pembentukan warna (untuk zat yang tidak berwarna atau warnanya kurang kuat)

2.      Penentuan panjang gelombang maksimum

3.      Pembuatan kurva kalibrasi

4.      Pengukuran konsentrasi sampel

Instrumentasi:

1.      Sumber suinat polikromatis berfungsi sebagai sumber sinar polikromatis dengan berbagai macam rentang panjang gelombang. Untuk spektrofotometer

·            UV menggunakan lampu deuterium atau disebut juga heavi hydrogen

·            Vis menggunakan lampu tungsten yang sering disebut lampu wolfram

·            UV-Vis menggunakan photodiode yang telah dilengkapu monokromator

2.      Monokromator berfungsi sebagai penyeleksi panjang gelombang yaitu mengubah cahaya yang berasal dari sumber sinar polikromatis menjadi cahaya monokromatis. Jenis monokromator yang saat ini banyak digunakan adalah gratting atau lesa prisma dan filter optik.

3.      Sel sampel (kuvet) berfungsi sebagai tempat meletakkan sampel. Cuvet biasanya berbentuk persegi panjang dengan lebar 1 cm

4.      Detektor berfungsi menangkap cahaya yang diteruskan dari sampel dan mengubahnya menjadi arus listrik

5.      Meter/ Recorder

Meter/ Recorder adalah suatu alat untuk membaca isyarat dari setektor untuk menganalisa kimia secara spektrofotometri, pengaruh berkurangnya intensitas sinar disebabkan oleh pemantulan pada dinding kuvet dapat dihilangkan dengan pemakaian sel pembanding yang sama disebut blangko.