Pembuatan Media Pembenihan uji mikroba (Lay, 1994)

1. Media Nutrien Agar

      Sebanyak 20 gram serbuk medium Nutrien Agar (NA) dilarutkan dalam 1 liter air suling dan dipanaskan diatas pemanas sampai mendidih dan larut sempurna. Kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.

2. Potato Dekstosa Agar (PDA)

  Sebanyak 39 gram serbuk PDA dilarutkan dalam 1 liter air suling dalam erlenmeyer dan dipanaskan diatas pemanas sampai mendidih dan larut sempurna.. Kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.

Peremajan Mikroba Uji

            Peremajaan dilakukan dengan memindahkan satu ose mikroba dari  masing-masing stok murni ke dalam medium baru. Untuk bakteri ke dalam medium NA diinkubasi pada suhu 37°C selam 24 jam, dan untuk jamur dalam medium PDA yang diinkubasi pada suhu 25°C selama 72 jam.

Pembuatan Suspensi Mikroba Uji

         Koloni bakteri uji disuspensikan dalam NaCl fisiologis dengan cara mengencerkannya dalam tabung reaksi dan dihomogenkan. Jumlah bakteri dalam suspensi yang diukur dengan spektrofotometer UV-Vis hingga diperoleh suspensi dengan transmitan 25% pada panjang gelombang 580 nm untuk bakteri dan transmitan 90% pada panjang gelombang 530 nm untuk jamur.

Pembuatan Larutan Uji

            Dibuat larutan ekstrak etanol daun senduduk dengan konsentrasi 10%, 20%, 30% dan 40% yang dilarutkan dengan DMSO. Sedangkan untuk infusa dibuat konsentrasi 10%, 20%, 30% dan 40% yang dilarutkan dengan aquadest.